- 抗原与抗体反应：将标本(非标记抗原)、标记抗原和抗血清顺序定量加入小试管内置室温(15～30℃)作用24h使其充分竞争结合。
- B、F分离：分离技术多种多样常用沉淀法。 ①第二抗体沉淀法：又称双抗体法在受检抗原与第一抗体特异性反应后加入相应的第二抗体使形成的抗原-第一抗体-第二抗体的复合物共沉一经离心即可使结合标记抗原B与游离抗原F分离。本法是特异性沉淀分离完全非特异性结合力低。但第二抗体用量较大成本较高。此外血清浓度、抗凝剂的有无因素可在一定程度上影响结果。 ②聚乙二醇(PEG)沉淀法：使蛋白质处于等电点状态水化层破坏而导致蛋白质沉淀。本法优点是PEG制备方便、价廉、分离快速缺点是非特异沉淀物较多分离不完全。 ③第二抗体-聚乙二醇沉淀法：本法既有PEG法的快速沉淀优点且保持第二抗体特异性沉淀的作用又减少第二抗体用量并降低PEG浓度使非特异沉淀物减少。 ④活性炭吸附法：利用活性炭表面活性将小分子的游离部分吸附。如在活性炭表面涂上一层葡聚糖使它表面具有一定孔径的网眼从而允许小分子游离抗原或半抗原逸入而被吸附而大分子复合物则被排斥在外。在抗原与抗体反应后加入葡聚糖-活性炭放置5～10min使游离抗原吸附在活性炭颗粒上离心使颗粒沉淀上清液中含有结合的标记抗原。
- 放射性强度测定：B和F分离后即可测定其放射性强度。
- 测量仪器有两类：液体闪烁计数仪(测β射线)和晶体闪烁计数仪(测γ射线)。计数单位是探测器输出的电脉冲数单位为cpm(脉冲数/min)。 每次测定均需作一标准曲线图以标准抗原的不同浓度为横坐标以测到的相应放射性强度为纵坐标作图。放射性强度可任选B或F亦可采用计算值B/B+F、B/F或B/B0。标本应作双份测定取其平均值在标准曲线上查出相应的受检抗原浓度。
检查过程
本法分三个步骤即抗原与抗体反应、B和F分离和放射性测定。
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